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新推出蛋白米兰官方下载入口

更新時間:2016-11-18      點擊次數:5053

2 、裝柱說明
2.1  凝膠的預處理
Sephadex LH-20 為(wei) 幹粉,初次使用前必須進行預處理。溶脹過程中嚴(yan) 禁使用磁力攪拌, 以
免使微球破碎。
加入足夠的去離子水進行溶脹,室溫 3 小時以上,使其充分膨脹。亦可選擇 20-50%乙醇進 行
溶脹,溶脹不要選擇純有機溶劑。 Sephadex LH-20 樣品 1g 在水中的床體(ti) 積是
4.5-5.5ml,在純乙醇中的床體(ti) 積是 3.5-4.5ml。使用 Sephadex LH-20,可用 0.1M
NaOH 浸泡24小時,然後用去離子水清洗幹淨。
將溶脹好的微球按照 3:1(v/v)加入水或 buffer 攪拌使其形成均勻的 75%膠懸液。如果是
重複使用的可以將 20%乙醇傾(qing) 去,加水或 buffer 攪拌均勻成 75%的膠懸液。
2.2  裝柱材料及裝柱溶液
米兰官方下载入口:以 GE XK16/200 或宸喬(qiao) LK15200 為(wei) 例進行進行介紹
裝柱儀(yi) 器:低壓層析係統 裝柱溶液:去離子水
注:所使用的材料及溶液應與(yu) 色譜操作的溫度一致;米兰官方下载入口篩網
孔徑為(wei) 28μm(500 目)或 18μm(800 目)。
計算所需介質的量:柱床體(ti) 積為(wei) 1L 時所需 75%膠懸液約為(wei) 1*1.15/0.75=1.53L。
裝柱:
1). 檢查米兰官方下载入口,確保各部件完整、幹淨。安裝下柱頭,擰緊 O 型圈後,將米兰官方下载入口垂直固定 在
鐵架台上,用水平儀(yi) 檢查並調整,使米兰官方下载入口保持水平。
2). 米兰官方下载入口中加入適量的裝柱溶液,以除去柱子中的空氣。關(guan) 閉柱子出口,柱內(nei) 保留 1-2cm
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高度的裝柱溶液。
3). 用玻璃棒緊靠柱內(nei) 壁引流,將膠懸液連續倒入米兰官方下载入口中,以減少氣泡的產(chan) 生。介質自然
沉降至體(ti) 積不再變化,此時介質和溶液出現分層,上層溶液*澄清。
4). 連接上柱頭至低壓層析係統,開泵以一定流速排出管路中殘留的空氣,暫停係統,將上
柱頭安裝至米兰官方下载入口上,柱頭下端距離膠麵約 1cm,開泵以 30cm/h 流速壓柱至柱床體(ti) 積不
再變化。暫停係統,略擰鬆 O 型圈,向下轉動調節杆使下端距離膠麵 0.5-1cm。
5). 擰緊 O 型圈,開泵以zui大流速 70%壓柱 3CV 以上,至柱床體(ti) 積不再變化,在界麵處做
好標記。
6). 關(guan) 閉泵,關(guan) 閉柱下端出口,使米兰官方下载入口上端和泵斷開,向下轉動調節杆,至記號處以下 0-
0.5cm 停止,關(guan) 閉上接口。裝柱完成。

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