裝柱子(添矽膠)時,有兩(liang) 種方法:即濕法裝柱和幹法裝柱,二者各有優(you) 劣。不論幹法還是濕法,矽膠(固定相)的上表麵一定要平整,並且矽膠(固定相)的高度一般為(wei) 15cm左右,太短了可能分離效果不好,太長了也會(hui) 由於(yu) 擴散或拖尾導致分離效果不好。
濕法裝柱是先把矽膠用適當的溶劑拌勻後,再填入柱子中,然後再加壓用淋洗劑 “走柱子”,本法大的優(you) 點是一般柱子裝的比較結實,沒有氣泡。
幹法裝柱則是直接往柱子裏填入矽膠,然後再輕輕敲打柱子兩(liang) 側(ce) ,至矽膠界麵不再下降為(wei) 止,然後再填入矽膠至合適高度,後再用油泵直接抽,這樣就會(hui) 使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑“走柱子”,一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍後的溶劑。通常上麵加壓,下麵再用油泵抽,這樣可以加快速度。
幹法裝柱較方便,但大的缺陷在於(yu) “走柱子”時,由於(yu) 溶劑和矽膠之間的吸附放熱(可以用手摸柱子明顯感覺到),容易產(chan) 生氣泡,這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙,二氯甲烷更為(wei) 明顯。
雖然產(chan) 生的氣泡在加壓的情況下不易察覺,但是,一旦撤去壓力,如在上樣、加溶劑等操作的時候,氣泡就會(hui) 釋放出來,嚴(yan) 重時,整個(ge) 柱子變花,樣品不可能平整地通過,當然也就談不上分離了。
解決(jue) 的辦法是:
、矽膠一定要填結實;
第二、一定要用較多的溶劑“走柱子”,一定要到柱子的下端不再發燙,恢複到室溫後再撤去壓力。
也有介紹在矽膠的上層填上一小層石英砂,防止添加溶劑的時候,使得樣品層不再整齊。但是如果小心上樣,添加溶劑,則沒有這個(ge) 必要。
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