如何填充Alltech色譜柱的固定相

 　　Alltech色譜柱固定相的填充質量影響Alltech色譜柱的分離度。而且，組分在Alltech色譜柱上的分離效果，主要取決於用在填充色譜柱的固定相。

　　固定相填充質量的好壞直接影響填充柱的柱效，因此，Alltech色譜柱固定相的填充方法也是很重要的。一根填充質量較高的Alltech色譜柱，通常其理論塔板數應該達到2000-3000/m，根據填充物粒度的大小，可分為(wei) 濕法裝柱和幹法裝柱。

　　濕法裝柱是先把矽膠用適當的溶劑拌勻後，再填入柱子中，然後再加壓用淋洗劑"走柱子"，本法zui大的優(you) 點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。幹法裝柱則是直接往柱子裏填入矽膠，然後再輕輕敲打柱子兩(liang) 側(ce) ，至矽膠界麵不再下降為(wei) 止，然後再填入矽膠至合適高度，zui後再用油泵直接抽，這樣就會(hui) 使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍後的溶劑。

　　濕法裝柱和幹法裝柱這二者各有優(you) 劣，不論幹法還是濕法，固定相的上表麵一定要平整，並且固定相的高度一般為(wei) 15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會(hui) 由於(yu) 擴散或拖尾導致分離效果不好。為(wei) 了獲得*的填充密度，可選擇適當的加壓、減壓或是手工填充的方法進行填充色譜柱。

　　(1)加壓法

　　加壓法是將填充柱的一端塞好矽烷化的玻璃棉，另一端與(yu) 填料池連接。先將固定相倒入填料池，填料池的另一端出口與(yu) 氮氣或空氣鋼瓶的減壓閥連結。對於(yu) 常見內(nei) 徑為(wei) 4.5mm的填充柱，可調節氣流為(wei) 30ml/min(氣流應隨內(nei) 徑大小作相應調整)，將填充池內(nei) 的固定相壓入填充柱中，同時用木棒輕敲填充柱體(ti) 使固定相填充均勻。裝柱要求要填充得均勻，緊密，切忌有空隙。固定相填充完畢後，在原來連接填充池的一端塞上矽烷化的玻璃棉，注意這一端應該與(yu) 色譜儀(yi) 的進樣室相連接，另一端作為(wei) 出口端與(yu) 檢測器相連接，不能接反。

　　加壓柱是一種比較好的方法，與(yu) 常壓柱類似，隻不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵(給魚缸供氣的就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(hui) 減低分離效果。

　　(2)減壓法

　　減壓法一般用於(yu) 填充長柱子。這個(ge) 方法采用真空泵抽氣，將填充柱的一端塞好矽烷化的玻璃棉後與(yu) 真空泵的緩衝(chong) 安全瓶相連接。為(wei) 了防止抽氣時潮濕空氣進入而使固定相性能受影響，可以在填料池加入固定相後，在入氣口接氯化鈣和矽膠幹燥塔，其他操作過程與(yu) 加壓填充法相同。

　　減壓柱能夠減少矽膠的使用量，感覺能夠節省一半甚至更多，但是由於(yu) 大量的空氣通過矽膠會(hui) 使溶劑揮發(有時在柱子外麵有水汽凝結)，以及有些比較易分解的東(dong) 西可能得不到，而且還必須同時使用水泵抽氣(很大的噪音，而且時間長)。

　　(3)手工填充法

　　手工填充法一般隻用於(yu) 某些塗有沸點較低固定液的固定相的填充。通常采用邊裝邊敲打的辦法。每次加進柱內(nei) 的填料約5cm。填充時應注意兩(liang) 點：一是固定相要填充均勻和緊密適度，柱內(nei) 不留有死空間或者間隙;二是要避免填充過程中敲打振動過猛，造成固定相機械粉碎。

　　壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chan) 品收集的時間，但是會(hui) 減低柱子的塔板數。所以其他條件相同的時候，常壓柱是效率zui高的，但是時間也zui長。

　　所以，我們(men) 可以根據不同的Alltech色譜柱，選擇合適的固定相填充方法。