什麽是凝膠色譜柱

　　凝膠色譜柱是一種用於(yu) 分離生物大分子的柱層析技術，它基於(yu) 形狀選擇和分子篩分離原理，在分子量、電荷、極性和親(qin) 疏水性等方麵具有較大的分辨能力和選擇特異性。該技術廣泛應用於(yu) 蛋白質、酶、核酸、多糖等複雜生物大分子的分離純化及結構表征，是生物化學、生物物理、生物醫學等學科中重要的工具。

　　凝膠色譜柱按照凝膠材料的類型和粒徑大小可分為(wei) 不同類型，包括聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)、瓊脂糖凝膠、超高分子量聚乙烯醇(PVA)凝膠、流動相中含有聚合物微球的凝膠等。這些凝膠具備不同的分子篩分離能力和通透性，可根據需要靈活選擇。

　　宸喬(qiao) 提供的Supdex30pg、Supdex75pg、Supdex 200pg為(wei) 新一代凝膠過濾介質，由葡聚糖與(yu) 高交聯度瓊脂糖共價(jia) 結合而成，高交聯度瓊脂糖賦予了介質較高的耐壓性，介質中分布的葡聚糖實現了其對不同大小蛋白和多肽的高度分離，能夠實現高流速下高分辨率的精細分離純化實驗。

　　基礎理論：

　　分子篩效應：凝膠色譜根據分子大小來實現分離。大分子無法進入凝膠的小孔徑，因此沿顆粒外部迅速通過，小分子則可以穿透這些孔隙，滯留時間相對較長，從(cong) 而實現分子按大小分離的效果。

　　分離機製：樣品中的不同大小分子在通過凝膠色譜柱時，會(hui) 按照其分子尺寸被分離。大分子因無法進入所有凝膠孔徑而首先流出，小分子則因深入孔徑而滯後流出。

　　組成結構：

　　柱體(ti) 積：指裝填凝膠後柱的實際使用容積，影響分離效果和分辨率。

　　填料：凝膠色譜柱的分離性能很大程度上取決(jue) 於(yu) 填料的性質，如粒徑、孔徑分布等。常見的填料有交聯葡聚糖、聚丙烯酰胺等，具有不同的分離範圍和適用性。

　　應用範圍：

　　1. 蛋白質純化：凝膠色譜柱可用於(yu) 分離純化特定分子量、極性、親(qin) 疏水性或電荷的蛋白質。例如，離子交換色譜柱可用於(yu) 根據蛋白質的電荷性質進行分離，而分子篩色譜則可根據分子大小進行分離。

　　2. 酶學研究：酶活性通常與(yu) 其分子結構和化學性質相關(guan) ，因此凝膠色譜柱可用於(yu) 分離純化和表征各種酶，包括氧化酶、酰胺酶、葡萄糖酸脫氫酶等。

　　3. 核酸純化：它也可用於(yu) 純化DNA、RNA以及相關(guan) 蛋白質複合物。例如，凝膠超濾色譜柱可用於(yu) 分離純化含有特定大小DNA分子的混合溶液，而脫鹽凝膠色譜柱可用於(yu) 分離DNA與(yu) 蛋白質複合物。

　　4. 多糖分析：它可用於(yu) 分離分子量相近的多糖分子，如分離賴氨酸聚糖、明膠、甘露聚糖等。

　　凝膠色譜柱是一種分離生物大分子(如蛋白質、多肽、核酸等)的常用方法。在分離過程中，生物大分子混入流動相中，通過不同的親(qin) 和性與(yu) 固定在色譜柱中的凝膠粒子相互作用而實現分離。操作過程如下：

　　一、準備工作：

　　1.檢查色譜柱是否安裝在專(zhuan) 業(ye) 色譜機上並插好了輸液端口;

　　2.整體(ti) 清潔柱外表和輸液端口;

　　3.配置所需緩衝(chong) 液，並過濾去雜質;

　　4.調整專(zhuan) 業(ye) 色譜機參數，如流速、檢測方式(如紫外光譜)、樣品注入量等。

　　二、樣品製備與(yu) 加載：

　　1.根據樣品特性調整緩衝(chong) 液pH值並稀釋;

　　2.樣品加入吸附管中，使用低爆粘度管口接凝膠色譜柱頂部端口;

　　3.在柱頂注入適量緩衝(chong) 液，待液體(ti) 滲透後加入樣品。

　　三、洗脫：

　　1.待樣品全部加完，緩慢注入適量緩衝(chong) 液進行洗脫;

　　2.通過檢測尋找目標物質，做到用盡緩衝(chong) 液;

　　3.延長洗脫時間以沉澱剩餘(yu) 廢物。

　　四、洗脫和回收：

　　1.將樣品分進多個(ge) 樣品管中，不同管內(nei) 含有不同樣品;

　　2.根據需要洗滌外部顆粒物，還原道特定化合物;

　　3.用標準梯度洗脫樣品並收集目標物;

　　4.測定樣品的吸收率，結合其他實驗數據進行數據分析。

　　凝膠色譜柱是一種重要的生物分離純化技術，其應用廣泛，用於(yu) 生物大分子的分離純化及表征，在生命科學相關(guan) 領域有著廣泛的應用前景。