以中壓柱層析法提取分離冬淩草甲素為(wei) 例
1.吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析矽膠裝人搪瓷盤置於(yu) 烘箱中,於(yu) 105C活化2H後,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用幹法填充,填滿整個(ge) 柱體(ti) ,不留死體(ti) 積,密封後用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵人溶劑,至溶劑流出止。
2.上樣
將冬淩草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解,泵人中壓柱柱頭,然後泵人石油醚1000RID。
3.洗脫
以一定比例的石油醚一丙酮為(wei) 洗脫液,60ML/MIN的流速進行梯度洗脫,柱的使用壓力為(wei) 2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC檢識展開劑丙酮一氯(2:8),顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液
至洗脫*,相同流份合並,回收溶劑。將冬淩草甲素流份合並蒸幹。加人適量甲醇熱溶後自然放置,析出結晶,為(wei) 冬淩草甲素。
4.米兰官方下载入口再生、平衡
有效成分經TLC檢識全部流出後,用純丙酮5000ML再生,丙酮一石油醚(5:95)平衡後,可再次上樣,反複使用(使用次數隨原料不同而異,一般可連續使用2-6個(ge) 月以上)。
5.重結晶
冬淩草甲素結晶析出*後,減壓過濾,然後用少量甲醇洗滌(洗滌液保留,作下次熱溶冬淩草甲素用)。將冬淩草甲素再用適量甲醇熱溶後放置,結晶再次析出,待結晶*後,抽濾,用少量洗滌,將結晶室溫下晾幹後置真空幹燥箱中,35度真空幹燥至恒重。密封於(yu) 瓶中,置幹燥器中保存。
6.薄層層析分析
取適量冬淩草甲素對照品及由上述方法得到的冬淩草甲素樣品甲醇溶解後點於(yu) 同一矽膠G薄層板上,以氯一丙酮(8:2)為(wei) 展開劑進行展開,5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色,於(yu) 105。C烘至斑點清晰。表明在該展開係統下,冬淩草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值,並呈現出同樣的藍綠色斑點,在製備的冬淩草甲素樣品中,沒有雜質斑痕。
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