深入探討高壓製備色譜

 　　製備色譜是指采用色譜技術製備純物質，即分離、收集一種或多種色譜純物質。那麽高壓製備色譜是怎樣的一個過程，其目的是什麽，這些都是本文將要探討的內容。

　　分析色譜是製備色譜的基礎。當我們(men) 在分析色譜上取得了良好的分離效果時，可以將其放大，應用到製備色譜上，由此，我們(men) 需要考慮調整上樣量，流速，梯度：

　　1.上樣量的調整：它與(yu) 分析色譜柱和製備色譜柱的柱長和柱內(nei) 徑有關(guan) ：具體(ti) 關(guan) 係時;製備柱上樣量/分析柱上樣量=製備豬場/分析柱長*製備柱內(nei) 徑的平方/分析柱內(nei) 徑的平方;

　　2.流速的調整：製備柱流速/分析柱流速=製備柱體(ti) 積/分析柱體(ti) 積=製備柱長/分析柱長*製備柱內(nei) 徑的平方/分析柱內(nei) 徑的平方;

　　3.梯度的調整：製備柱梯度/分析柱梯度=製備柱體(ti) 積/分析柱體(ti) 積*製備柱流速/分析。

　　高壓製備色譜中的“製備”這一概念指獲得足夠量的單一化合物，以滿足研究和其它用途。高壓製備色譜的出現，使色譜技術與(yu) 經濟利益建立了。製備量大小和成本高低是製備色譜的兩(liang) 個(ge) 重要指標。其中，氣相製備色譜主要用於(yu) 石油化工產(chan) 品和揮發性天然產(chan) 物的色譜純樣品製備。

　　一、高壓製備色譜到底是什麽(me) ?

　　分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(ge) (或者幾個(ge) )純物質的含量。製備色譜的目的，是從(cong) 混合物中得到純物質。為(wei) 了加快分離的時間與(yu) 提高分離的效率，製備色譜的的進樣品量很大，導致製備色譜柱子的分離負荷的相應加大，也就必須加大色譜柱填料，增大製備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相。然而，當色譜柱上樣品負載加大的時候，往往導致柱效急劇下降而得不到純的產(chan) 品。製備色譜，要解決(jue) 容量與(yu) 柱子效果之間的矛盾，對重現性也要考慮。從(cong) 經濟上來說。製備色譜要爭(zheng) 取少用填料，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chan) 品。

　　二、固定相的選擇

　　矽膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為(wei) 色譜柱的填料。 有不少文獻報道，對填料可以進行一下處理提高了分離效果，如，對矽膠進行的硝酸銀(或緩衝(chong) 液)處理。

　　三、樣品的前處理

　　高壓製備色譜柱子由於(yu) 處理的樣品多，比分析柱子更容易受汙染，所以，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結晶、固相萃取等簡單的分離方法，如果用得上，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質。

　　四、裝柱方法的選擇

　　根據固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guan) 係很大，顆粒度的減少會(hui) 導致裝柱的難度。

　　1.濕法裝填：一般來說，顆粒直徑小於(yu) 20-30um的固定相采用濕法裝填。

　　2.敲擊-裝填：所謂“敲擊-裝填”技術適用於(yu) 顆粒直徑大於(yu) 25um的固定相。

　　3.濕法：濕法的目的是迫使相對稀鬆的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從(cong) 而減少空隙的形成。

　　然而，當柱直徑大於(yu) 20mm，所加壓力為(wei) 30-40bar時，高壓懸漿裝填技術就變得十分複雜，為(wei) 將小顆粒固定相裝入更大得製備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術。這種方法，先將固定相懸漿(或偶爾是幹填充物)裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩(liang) 種：徑向壓縮和軸向壓縮。 濕法裝柱需要一定的設備，在柱子填完後，應用有柱效的測量，對柱效低的柱子應該重填。

　　五、產(chan) 品的收集

　　手工餾分收集費時費力，自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。

　　六、超載、邊緣切割、中心切割、放大技術與(yu) 非線性效用

　　在高壓製備色譜中，因為(wei) 沒有必要達到分析色譜那樣的分離度，可以在一定範圍內(nei) 大大加大進樣的濃度和體(ti) 積。在做分離的時候，也有一些分析色譜的時候，不能用到的技巧。

　　七、柱轉換技術

　　通過接頭或者閥門，實現柱子的簡單延長，或者比較方便地實現對其中一個(ge) (或幾個(ge) )組分的精製。